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      雙垂直電泳儀應用與操作指南

      雙垂直電泳儀應用與操作指南:

      一、應用領域

      雙向電泳(Two-Dimensional Electrophoresis, 2-DE)

      原理:第一向基于蛋白質的等電點(等電聚焦,IEF),第二向基于分子量(SDS-PAGE)。兩次垂直分離顯著提升分辨率,適用于復雜樣品的蛋白質組學研究,可分離數千種蛋白質。

      案例:在癌癥研究中用于分離腫瘤組織與正常組織的蛋白質,識別疾病標志物。

      蛋白質復合物分析

      步驟:第一向保持復合物完整(非變性條件),第二向分解為亞基(SDS變性條件),分析相互作用及組成。

      核酸分析

      應用:第一向為瓊脂糖凝膠電泳(分子量分離),第二向為變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(序列差異分析),用于研究RNA或DNA的構象變化。

      疾病標志物篩選

      實例:通過比較健康與患病樣本的雙向電泳圖譜,發現特定蛋白質點作為潛在生物標志物,用于阿爾茨海默癥等疾病研究。

      二、儀器結構與特點

      雙凝膠系統

      垂直排列設計:上下兩層凝膠獨立運行,支持不同電泳模式(如IEF和SDS-PAGE),減少操作間干擾。

      垂直電場設計

      優勢:電場方向與凝膠平面垂直,減少擴散,提高條帶銳度,尤其適合高通量分離。

      高分辨率與靈敏度

      檢測系統:集成熒光成像、銀染或考馬斯亮藍染色技術,可檢測低豐度蛋白(納克級)。

      自動化控制

      功能模塊:程序化調節電壓、溫度及電泳時間;部分型號配備實時監測,確保重復性。

      三、操作注意事項

      凝膠制備

      均勻性:確保凝膠聚合均勻,避免氣泡,尤其是等電聚焦膠的pH梯度穩定性。

      緩沖液配置

      精確性:使用高純度試劑,如Tris-Gly緩沖液需準確稱量,避免離子強度波動影響遷移率。

      電場參數優化

      分階段調整:初始低電壓(等電聚焦階段),后續高電壓(SDS-PAGE階段),防止過熱導致蛋白變性。

      安全規范

      防護措施:佩戴手套操作有毒試劑(如丙烯酰胺),確保設備接地,避免電擊風險。

      數據分析

      軟件工具:使用ImageMaster 2D Platinum等軟件進行斑點匹配、定量及數據庫比對。

      四、與傳統電泳對比優勢

      分辨率提升:雙向分離較單向電泳信息量呈指數增長,適合復雜混合物分析。

      靈活性:適應多種樣本類型(如膜蛋白需特殊裂解液),支持多維度分析(電荷、分子量、構象)



      TEL:13798128437

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